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抗体选择有哪些注意点,看这篇就够了

人阅读 发布时间:2019-09-02 15:54

抗原(Antigen): 是指能够刺激机体产生免疫应答,并能与免疫应答产物抗体和致敏淋巴细胞在体内外结合,发生免疫效应的物质。
那些可作为抗原?
多肽,蛋白,小分子化合物,细菌,病毒 ......


抗体(Antibody): 是 B 细胞识别抗原后增值分化为浆细胞所产生的一种蛋白质,主要存在于血清等体液中。
抗体种类有那些?
多克隆抗体---简称多抗(Polyclonal Antibody ),单克隆抗体---简称单抗(Monoclonal Antibody)


多抗和单抗有那些区别?
多抗:
制备简单,周期短,价格低
特异性差
产量低,批间差大
应用于一些对特异性要求不是特别高的实验,比如 WB, IP, 且不需要太大的抗体量,时间比较紧。

单抗:
工艺复杂,周期长,价格高
特异性好
可以稳定大量生产
应用于一些特异性要求特别高的实验,比如 IF, FACS.

通过以上介绍,您可能还是无法确定到底是选多抗还是单抗,从经费和实验的角度,我们是这么认为的。
1. 如果经费很充足,时间也允许,而且要用的抗体量也很大,当然应该选单抗,但是如果经费不充足,又没有文献能证明这个蛋白或者多肽能检测到内源性,那么建议先做多抗,这样既省钱又省时间。如果做多抗验证确认有用,后续还长期需要这个抗体,再来做单抗也不错。
2. 单抗相对于多抗而言,特异性要更好。每个单抗识别目的蛋白或者多肽的一个表位,不同的单抗,有可能识别不同的表位。通过提供多个阳性抗体细胞株,已得到适合于目的蛋白或者多肽的特异性抗体。而多抗是几乎识别蛋白质所有表位的混合抗体,由于一个蛋白质的部分序列可能与其他蛋白质相同或者相似,有可能造成在检测时无法区分。


分析肽段做抗原,需要注意那些方面?
1. 首先要看实验目的,如果是做 WB,那么多肽或者蛋白都可以做抗体,如果是做 IP,通常抗原的位点多点会好些,这时最好是挑选蛋白片段。
2. 想要兼顾同源性还是避开同源性。


3 个月做出来的单抗可靠吗?
有的公司为了缩短周期和成本,通常会采用以下 2 种方法。
1. 采取快速免疫,将常规的 2-3 个月缩短到 1 个月以内。这样时间是缩短了,但是产生的抗体亲和力不高,亚型会有 IgM。
2. 不做亚克隆或者只做 1 轮亚克隆,会导致细胞株不稳定,最终会导致分泌抗体的能力丧失。


多抗和单抗的制备流程是怎么样的?
多抗:半抗原(多肽)偶联后或者完全抗原(蛋白)免疫 →取少量血清进行效价检测→效价合格取血→抗血清→Protein A/G 纯化或抗原亲和纯化




单抗:免疫→细胞融合→筛选,亚克隆→杂交瘤细胞株扩增 / 冻存→小鼠腹水制备→Protein A/G 纯化→亚型鉴定

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